Maymun Çiçeği Virüsü Gerçek Zamanlı PCR Kiti
Ürün Detayları
Kullanım amacı
Gerçek zamanlı PCR sistemleri kullanılarak insan serumu veya lezyon eksüda örneklerinde Monkeypox Virüsünün tespiti için kullanılır.
Test Prensibi
Bu ürün, floresan prob bazlı bir Taqman® gerçek zamanlı PCR test sistemidir.Maymun Çiçeği Virüsünün F3L geninin tespiti için spesifik primerler ve problar tasarlanmıştır.Korunmuş insan genini hedef alan dahili kontrol, yanlış negatif sonuçları önlemek için numune toplama, numune işleme ve gerçek zamanlı PCR sürecini izler.Kit, Maymun Çiçeği Virüsü tespiti için gerekli malzemeleri içeren tamamen önceden karıştırılmış liyofilize bir sistemdir: nükleik asit amplifikasyon enzimi, UDG enzimi, reaksiyon tamponu, spesifik primer ve prob.
Ana İçerikler
Sağlanan bileşenler tabloda listelenmiştir.
| Bileşenler | Paket | Bileşen |
| Maymun çiçeği virüsüLiyofilize Premiks | 8 şeritli PCR tüpü× 6 poşet | Primerler, problar, dNTP/dUTP Karışımı, Mg2+, Taq DNA polimeraz, UDG Enzimi |
| MPV Pozitif Kontrol | 400 μL×1 tüp | Hedef geni içeren DNA dizileri |
| MPV Negatif Kontrolü | 400 μL×1 tüp | İnsan gen segmentini içeren DNA dizileri |
| Çözünme Çözümü | 1 mL×1 tüp | Sabitleyici |
| Uygunluk belgesi | 1 parça | / |
İşlem akışı
1. ÖrnekToplamak:Örnek uygun şekilde steril tüplere toplanmalıdır.
standart teknik özelliklere sahip.
2. Reaktif Hazırlama (Reaktif Hazırlama Alanı)
Kitin bileşenlerini çıkarın ve bekleme modunda kullanmak üzere oda sıcaklığında dengeleyin.
3. Numune İşleme (Numune İşleme Alanı)
3.1 Nükleik asit ekstraksiyonu
Viral DNA ekstraksiyon kitlerinin ilgili gereksinimlerine ve prosedürlerine göre nükleik asit ekstraksiyonu için 200μL sıvı numunelerin, Pozitif Kontrol ve Negatif Kontrol'ün alınması tavsiye edilir.
3.2 Liyofilize tozun çözülmesi ve şablon eklenmesi
Numune sayısına göre Monkeypox Virüsü Liyofilize ön karışımı hazırlayın.Bir numunenin Liyofilize ön karışım tozu içeren bir PCR tüpüne ihtiyacı vardır.Negatif kontrol ve pozitif kontrol iki numune olarak ele alınmalıdır.
(1) Liyofilize premiks içeren her PCR tüpüne 15μL Çözünme Solüsyonu ekleyin, ardından her PCR tüpüne sırasıyla 5μL ekstrakte edilmiş numuneler/Negatif Kontrol/Pozitif Kontrol ekleyin.
(2) PCR tüplerini sıkıca kapatın, liyofilize toz tamamen çözülene ve harmanlanana kadar PCR tüplerini elle hafifçe vurun, düşük hızda anlık santrifüjleme ile sıvıyı PCR tüplerinin tabanına toplayın.
(3) Tespit için ortak Gerçek Zamanlı PCR cihazı kullanılıyorsa, PCR tüplerini doğrudan amplifikasyon alanına aktarın;Tespit için BTK-8 kullanıyorsanız aşağıdaki işlemleri yapmanız gerekir: PCR tüpünden 10 μL sıvıyı BTK-8'in reaksiyon çipi kuyucuğuna aktarın.Bir PCR tüpü çip üzerindeki bir kuyucuğa karşılık gelir.Pipetleme işlemi sırasında pipetin 90 derece dikey olduğundan emin olun.Aerosol bariyerli pipet uçları orta kuvvetle kuyunun ortasına yerleştirilmeli ve birinci vitese ulaştığında pipeti itmeyi bırakmalıdır (kabarcıkları önlemek için).Kuyucuklar doldurulduktan sonra, tüm kuyucukları kaplayacak şekilde reaksiyon çipi membranını çıkarın ve çip daha sonra amplifikasyon tespit alanına aktarılır.
4. PCR Amplifikasyonu (Tespit Alanı)
4.1 PCR tüplerini/reaksiyon çipini reaksiyon tankına yerleştirin ve her reaksiyonun adını ilgili sıraya göre iyice ayarlayın.
4.2 Floresans saptama ayarları: (1) Maymun çiçeği virüsü (FAM);(2) Dahili Kontrol (CY5).
4.3 Aşağıdaki bisiklet protokolünü çalıştırın
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio Protokolü:
| Adımlar | Sıcaklık | Zaman | Döngüler | |
| 1 | Ön denatürasyon | 95°C | 2 dakika | 1 |
| 2 | Denatürasyon | 95°C | 10 saniye | 45 |
| Tavlama, uzatma, floresans edinimi | 60°C | 30 saniye | ||
BTK-8 Protokolü:
| Adımlar | Sıcaklık | Zaman | Döngüler | |
| 1 | Ön denatürasyon | 95°C | 2 dakika | 1 |
| 2 | Denatürasyon | 95°C | 5 saniye | 45 |
| Tavlama, uzatma, floresans edinimi | 60°C | 14 saniye | ||
5. Sonuç analizi (lütfen Cihazın Kullanım Kılavuzuna bakın)
Reaksiyondan sonra sonuçlar otomatik olarak kaydedilecektir.Analiz etmek için "Analiz Et"e tıkladığınızda cihaz, sonuç sütunundaki her numunenin Ct değerlerini otomatik olarak yorumlayacaktır.Negatif ve pozitif kontrol sonuçları aşağıdaki "6. Kalite Kontrol"e uygun olacaktır.
6. Kalite kontrol
6.1 Negatif Kontrol: FAM kanalında Ct yok veya Ct>40, CY5 kanalında normal amplifikasyon eğrisi ile Ct≤40.
6.2 Pozitif Kontrol: Normal amplifikasyon eğrisine sahip FAM kanalında Ct≤35, normal amplifikasyon eğrisine sahip CY5 kanalında Ct≤40.
6.3 Yukarıdaki kriterlerin tümü karşılanırsa sonuç geçerlidir.Aksi halde sonuç geçersizdir.
Sonuç Yorumlama
Aşağıdaki sonuçlar mümkündür:
| FAM kanalının Ct değeri | CY5 kanalının Ct değeri | Tercüme | |
| 1# | Ct yok veya Ct>40 | ≤40 | Maymun çiçeği virüsü negatif |
| 2# | ≤40 | Herhangi bir sonuç | Maymun çiçeği virüsü pozitif |
| 3# | 40~45 | ≤40 | Tekrar test edin;eğer hala 40~45 ise 1# olarak rapor edin |
| 4# | Ct yok veya Ct>40 | Ct yok veya Ct>40 | Geçersiz |
NOT: Geçersiz sonuç ortaya çıkarsa numunenin tekrar toplanıp test edilmesi gerekir.
Sipariş Bilgisi
| Ürün adı | Kedi.HAYIR | Boyut | Örnek | Raf ömrü | Trans.& Sto.Sıcaklık |
| Maymun Çiçeği Virüsü Gerçek Zamanlı PCR Kiti | B001P-01 | 48 test/kit | Serum/Lezyon Eksüdası | 12 ay | -25~-15°C |
